提到ELISA，搞科研的童鞋們都很自信。“不就是zui簡單的抗原抗體反應(yīng)嗎？簡單”是大多數(shù)童鞋的回答。但就是大家口中zui簡單的免疫反應(yīng)，也掃倒了一大片人啊！假陽性或假陰性結(jié)果往往讓這部分童鞋哭笑不得卻又百思不得其解！
表著急，小編這就將師兄、師姐們的經(jīng)驗奉上。
樣本處理經(jīng)驗：血清是zui常用的 ELISA 標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。
內(nèi)源性物質(zhì)干擾解決方案：
有人認(rèn)為大約 40% 的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
（1）類風(fēng)濕因子 人血清中 IgM、IgG 型類風(fēng)濕因子（RF）可以與 ELISA 系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的 FC 段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決的辦法是：用 F(ab)2 替代完整的 IgG、標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG 的固相吸附劑處理（將熱變性 IgG 加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）、檢測抗原時，可以用 2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使 RF 降解。
（2）補體 ELISA 系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其 FC 段的補體 C1q 分子結(jié)合位點被暴露出來，使 C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：用 EDTA 稀釋標(biāo)本、用 53℃，10 min 或 56℃，30 min 加熱血清使 C1q 滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將 ELISA 系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物 Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體 開展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠 Ig (s) 抗體。這些病人 ELISA 測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應(yīng)物質(zhì) 類 AFP 樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對 ELISA 測定結(jié)果有干擾作用。
你要的ELISA結(jié)果出錯解決方案在這里，都拿走吧！ | 每日生物評論 +復(fù)制鏈接
在線咨詢