小鼠環(huán)氧合酶(COX)elisa試劑盒原來這樣操作
小鼠環(huán)氧合酶(COX)elisa試劑盒基本信息
環(huán)氧合酶(COX)是花生四烯酸代謝的限速酶，具有環(huán)氧合酶和過氧化物酶功能的雙重酶。目前COX有兩個亞型，即COX-1和COX-2，其中COX-2是一種誘導(dǎo)酶，在組織損傷、炎癥等情況下表達(dá)增強(qiáng)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，COX-2與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、腫瘤新生血管的形成以及腫瘤的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，并且COX-2抑制劑有望成為腫瘤治療新的靶點。文章綜述國內(nèi)外COX-2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)、調(diào)控及其致癌機(jī)制方面的研究新進(jìn)展，為子宮內(nèi)膜癌的防治提供新的靶目標(biāo)。
小鼠環(huán)氧合酶(COX)elisa試劑盒操作方法簡介
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務(wù)，客戶準(zhǔn)備好樣本，上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務(wù)。其他地區(qū)的客戶，樣本用泡沫箱子包好，放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)， 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。
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